| 1.前增菌：（20 年 月 日） 取檢樣 加入含BPW225mL的均質(zhì)杯中，以 r/min均質(zhì) min，轉(zhuǎn)入錐形瓶 ℃培養(yǎng) ；h 2.增菌：（20 年 月 日） 輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取 1 mL，轉(zhuǎn)種于 10 mL TTB 內(nèi)，于 ℃培養(yǎng) h。同時，另取 1 mL，轉(zhuǎn)種于 10 mL SC 內(nèi)，于 ℃培養(yǎng) h； 3.分離：（20 年 月 日） 分別用接種環(huán)取增菌液 1 環(huán)，劃線接種于一個 BS 瓊脂平板和一個 XLD 瓊脂平板。于 ℃分別培養(yǎng) h （XLD 瓊脂平板） h（BS瓊脂平板），觀察各個平板上生長的菌落, BS上可疑菌落形態(tài)：※菌落顏色：□黑色有金屬光澤□棕褐色□灰色□灰綠色 ※周圍培養(yǎng)基：□呈黑色或棕色□不變□ ※□其它： XLD上可疑菌落形態(tài)：□粉紅色□黃色□黑色中心□全部黑色的菌落□其它： 4.生化試驗：（20 年 月 日） 自選擇性瓊脂平板上分別挑取 個典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要**,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基、蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗）、尿素瓊脂 （pH7.2）、***（KCN）培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于 ℃培養(yǎng) ，將已挑菌落的平板儲存于室溫保留24 h，以備必要時復查。反應結果見表1、表2，表3為補做試驗。h 表1在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基內(nèi)的反應結果 | 三糖鐵瓊脂 | 賴氨酸脫羧酶試驗 培養(yǎng)基 | 初步判斷 | | 斜面 | 底層 | 產(chǎn)氣 | 硫化氫 | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | 注：K：產(chǎn)堿，A：產(chǎn)酸；＋：陽性，－：陰性；初步判斷：可疑沙門氏菌屬或非沙門氏菌。 | 表2生化反應初步鑒別表 | 硫化氫（H2S） | 靛基質(zhì) | pH7.2尿素 | ***（KCN） | 賴氨酸脫羧酶 | 反應序號（判斷） | | | | | | | | | 注：＋陽性；－陰性；＋/－陽性或陰性；反應序號（判斷）：A1、A2、A3或非沙門氏菌。 | 表3補做試驗（選做） | 甘露醇 | 山梨醇 | ONPG | 結果判斷 | | | | | | | 注：＋：陽性，－：陰性；結果判斷：沙門氏菌或非沙門氏菌。 | 5.血清學鑒定：（20 年 月 日） 玻片上劃出2個約1cm×2cm的區(qū)域，挑取1環(huán)待測菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個區(qū)域下部加1滴多價菌體（O）抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min，并對著黑暗背景進行觀察。 血清凝集結果： （+或-） 7.結果：（20 年 月 日） 沙門氏菌。 |